SARS-CoV-2の金ナノ粒子(AuNPs)と金ナノロッド(AuNRs)を用いたSPR検出の比較

Department of Chemistry, University of Warwick, Gibbet Hill Road, Coventry, U.K.らのグループは、SARS-CoV-2の金ナノ粒子(AuNPs)と金ナノロッド(AuNRs)を用いたSPR検出の比較について報告しています。
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acsmacrolett.1c00716

2,3-シアリルラクトースをAuNPsおよびAuNRsに固定化し、SPR検出法を用いてSARS-CoV-2を検出しました。

異方性粒子 (ナノロッドなど) の重要性を強調するために、球状の金ナノ粒子と金ナノロッドを互いに比較しました。
(1)AuNPs (40 nm) は ~520 nm で最大吸収を示し、AuNRs (10 × 38 nm) は ~780 nm で最大吸収を示しました。
(2)AuNPs(凝集によりシグナルを生成する)は、このスパイクタンパク質では有意なスペクトル変化を示しませんでしたが、AuNRsはスパイクタンパク質の濃度の増加とともにスペクトル変化を示しました。
(3) 一次臨床サンプルを使用した AuNRs からのシグナル出力は、RT-PCR からの Ct (サイクル閾値) 値と相関していました。

このようにして、AuNRsを使った方が検出能力が向上することが示されています。

ヒト界面活性タンパク質D(human SP-D)は、SARS-CoV-2の結合とDC-SIGN発現細胞への侵入を手助けする

College of Health, Medicine and Life Sciences, Brunel University London, Uxbridge, UKらのグループは、ヒト界面活性タンパク質D(human SP-D)は、SARS-CoV-2の結合とDC-SIGN発現細胞への侵入を手助けすると報告しています。
https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2022.960733/full

ヒトSP-D の組換えフラグメント(rfhSP-D) が、SARS-CoV-2 の DC-SIGN 発現細胞への結合を媒介する能力が評価されました。 DC-SIGN細胞表面発現を誘導するために、全長ヒトDC-SIGNのDNA配列を含むプラスミドをHEK 293T細胞にトランスフェクトして、DC-HEK細胞を作成し、その細胞をrfhSP-D (20μg/ml)で処理したSARS-CoV-2疑ウイルスに暴露しました。処理されたサンプル(DC-HEK + SARS-CoV-2疑ウイルス + rfhSP-D)では、未処理のサンプル(DC-HEK + SARS-CoV-2疑ウイルス)と比較して、約50%の結合効率が増加していました。
同様の実験を、PMA および IL-4 で処理することでネイティブ DC-SIGN の発現を誘導した THP-1 細胞を用いて行なったところ、rfhSP-D 処理は、未処理のコントロールと比較して、DC-SIGN を発現する THP-1 細胞へのSARS-CoV-2疑ウイルスの結合効率を約 25% 増加させることが分かりました。

分子モデルを用いてSARS-CoV-2およびDC-SIGN結合複合体を生成するために、ブラインドドッキングアプローチが試みられました。上位にランク付けされた結合複合体の分析により、スパイク タンパク質の NTD(N 末端ドメイン)は、DC-SIGN の CRD ドメインと相互作用することが明らかになりました。更に、DC-SIGN と SP-D を Spike タンパク質とドッキングすることによって三者複合体が生成されました。ドッキングされた上位ふたつの結合複合体(C1 と C2)の分子間相互作用を詳細に解析したところ、C1複合体とC2複合体の両方で、DC-SIGN(CRD)はSpikeタンパク質のNTDドメインと相互作用しており、C1 では、Spike タンパク質と rfhSP-D の間に直接的な分子相互作用はありませんでした。しかし、C2 では、Spike タンパク質は SARS-CoV-2のRBD を介して rfhSP-D と相互作用しています。

SP-D は RBD と相互作用し、DC-SIGN は SARS-CoV-2 スパイクタンパク質の NTD と相互作用していることが明確に示され、結論として、SP-D は DC-SIGN と SARS-CoV-2 スパイクタンパク質の相互作用を安定化させることが示されました。

bisecting GlcNAc の糖鎖修飾を受けたセルロプラスミンが膵がんの優れたバイオマーカーとなり得る

College of Basic Medical Sciences, Dalian Medical University, Dalian, Chinaらのグループは、bisecting GlcNAc の糖鎖修飾を受けたセルロプラスミンが膵がんの優れたバイオマーカーとなり得ると報告しています。
https://www.mdpi.com/2073-4409/11/15/2453/htm

健常対照群 (NC)と比較して、bisecting GlcNAc、マンノース、およびフコースらの糖鎖修飾相対量は、膵がん群 (PC) で有意に増加していました。また、急性膵炎群 (AP) との比較では、bisecting GlcNAcとフコシル化の相対存在量が、膵がん群で大幅に増加していました。しかしながら、フコシル化の相対量は、健常対照群と急性膵炎群の間あまり変化していないようでした。

糖鎖のみを用いてバイオマーカーを開発することには困難が伴うため、bisecting GlcNAcを含む血清糖タンパク質をビオチン化 PHA-E レクチンおよびストレプトアビジン アガロース ビーズでプルダウンし、nano LC-MS/MS で分析しました。その結果、バイオマーカー糖タンパク質候補として、セルロプラスミン(Cp)、アポリポタンパク質E(Apo-E)、トランスフェリン(Tf)の三つの糖タンパク質が挙げられました。

これらの候補の中で、セルロプラスミンが最高の診断能力を示しました。健常対照群と急性膵炎群、健常対照群と膵がん群、および膵がん群と急性膵炎群の間のセルロプラスミンの AUC は、それぞれ 0.917、0.972、および 0.757 となりました。

バチルス菌のバイオフィルム形成能力が植物病原菌を押さえるには非常に大切

College of Food Science and Light Industry, Nanjing Tech University, Nanjing, Chinaのグループは、バチルス菌のバイオフィルム形成がバチルス菌の根圏におけるコロニー形成を促し、植物病原菌に対する生物的防除を高めると報告しています。
https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2022.972393/full

バチルス菌は植物病原体に対する生物防除剤として使用され、それらのほとんどは細胞外高分子物質のひとつとしてポリ-γ-グルタミン酸 (γ-PGA) を生成することができます。

本研究では、バチルス・アストロファーガス NX-12 (γ-PGA 収量: 16.8 g/l) と、その γ-PGA 合成遺伝子をノックアウトした株 NX-12Δpgs を抗真菌能の観点から比較しています。
予想外にも、γ-PGA 合成酵素欠損株 NX-12Δpgs (γ-PGA 収量: 1.65 g/l) の抗真菌能力は in vitro で改善されましたが、NX-12Δpgs の生物防除能力は in situ で逆に大幅に減少してしまいました。

NX-12 によって生成された γ-PGA は、バイオフィルム形成と根圏のコロニー形成に非常に重要であることが示され、これによって、生物防除能力が効果的に改善されたのです。つまり、根圏における生物防除剤としてのバチルス菌ですが、本研究によって、その効果的なコロニー形成(縄張り形成)が、生物防除機能の発現にとって非常に重要な要素であることが示されています。


NX-12Δpgs (pMA5-pgs) は、NX-12ΔpgsをpMA5-pgsBCAプライマーを使って回復させたものです、ここで pgsBCA というのは、NX-12が持つγ-PGA合成遺伝子です。

バチルス・チューリンゲンシスから抽出したレクチン毒素のタンパク質構造

Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing, Chinaらのグループは、バチルス・チューリンゲンシスから抽出したタンパク質、Cry78Aa、の結晶構造について報告しています。
https://www.nature.com/articles/s42003-022-03754-6

バチルス・チューリンゲンシス、およびその殺虫性タンパク質を発現する遺伝子組み換え植物を使用した生物学的防除方法は、一部の害虫に対して効果的かつ経済的であることが証明されています。Cry78Aaは、イネウンカを効果的に殺すバチルス・チューリンゲンシス C9F1 株から同定された新規タンパク質であり、ヒメトビウンカ および トビイロウンカに対する中央致死濃度 (LC50) 値は、それぞれ 6.89 および 15.78 μg/mLです。Cry78Aaのこういった殺虫効果の活性は、in vitro の活性化や追加操作を必要としないため、フィールド試験への適用に非常に便利とされています。

この論文では、Cry78Aaの結晶構造が詳細に分析されました。この構造は、二つの独立したドメインで構成されています。S-型レクチンと最も高い同一性を共有する N-末端のトレフォイル・ドメインと、エアロリシン ファミリーに属する毒素としての細孔形成ドメインです。バイオアッセイ試験では、Cry78AaのNTDまたはCTD 単独では、ウンカ幼虫に対して毒性を持たないことを示しており、その殺虫活性は両方のドメインが強調して働くことで発現するものと考えられます。 Cry78AaのNTDは、レクチン機能を持ち、おそらく細胞膜表面のタンパク質または脂質に結合したガラクトース型糖鎖を認識することによって、その殺虫活性に重要な役割を果たすようです。

H-1抗原(糖鎖)を固定化した金ナノ粒子でM1化膿レンサ球菌を検出する

Faculty of Pharmacy, Tehran University of Medical Sciences, Iranらのグループは、M1 化膿レンサ球菌(M1 GAS)を検出するH-1抗原-金ナノ粒子凝集体(AuNPs)に基づくナノバイオセンサーについて報告しています。
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC9354983/

化膿レンサ球菌 (GAS) は、急性咽頭炎から重度の侵襲性疾患に至るまで、さまざまな臨床症状を引き起こすグラム陽性細菌です。連鎖球菌性咽頭炎の一般的な診断方法は、医師による身体診察と、咽頭スワブの細菌培養です。これまで、化膿レンサ球菌を診断して臨床に使用するために、さまざまなタイプのバイオセンサーが開発されてきました。それらは、抗体と抗原の相互作用、または等温核酸増幅技術に基づいています。それにも係わらず、それらは世界中の臨床医によって広く使用されている訳ではありません。問題は、コストにあると考えられます。

金ナノ粒子の凝集に基づくナノバイオセンサー自体は良く知られており、病原菌の簡易な診断法として研究されてきました。抗原(病原菌)に特異的なプローブを固定化した金ナノ粒子複合体が検査溶液中の抗原と相互作用することによって、ナノ粒子が凝集することを利用するものです。M1 GAS は口腔上皮細胞に存在する特異的な糖鎖構造である H-1 抗原に結合することが知られているため、本研究においては、プローブとしてLacto-N-fucopentaose I-biotin (H-1-biotin) をアビジンを固定化した金ナノ粒子に結合させして、 M1 GAS を検出しています。

SPRのピーク位置の赤方偏移の値に基づいて、M1 GAS の検出の検量線を 1 × 102 から 1 × 107CFU/ml までの濃度範囲でプロットしました。 その件、M1 GAS は広い濃度範囲 (1 × 103 ~ 1 × 106 CFU/ml) で線形性を示し、20分という短い検出時間で検出されることが分かりました。

Bisecting GlcNAcに最も特異的なレクチン

Department of Chemistry, Georgia State University, Atlanta GA USAらのグループは、bisecting GlcNAcに特異的なレクチンについて報告しています。
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC9241959/

多くの植物レクチンはbisecting GlcNAc があっても多くの影響は受けませんが、その中で PHA-E と Calsepa の結合は、bisecting GlcNAcの存在によって強化されました。低濃度 (1 μg/mL) であっても、PHA-E と Calsepa はbisecting GlcNAcの無い二分岐N-型糖鎖への結合を示しますが、これは、bisecting GlcNAcの同定と癌バイオマーカーの発見といった幅広いアプリケーションにおいて問題を引き起こす可能性があります。しかし、驚くべきことに、PHA-L はbisecting GlcNAcへの特異的認識を示しました。これは、例えば、β1-6 分岐型糖鎖が存在しない抗体などの構造をプローブする際に有望なレクチンとなる可能性があります。
しかし、PHA-Lは、多分岐のN-型糖鎖に強い特異性を持っていることには注意しておいた方が良いでしょう。

進行性子宮内膜症の診断にIgGのO-型糖鎖修飾がマーカーとなり得る

Division of Laboratory Diagnostics, Faculty of Pharmacy, Wroclaw Medical University, Polandらのグループは、血清 IgG3のO-型糖鎖修飾のの変化は、進行性子宮内膜症における炎症マーカーとなり得ると報告しています。
https://www.mdpi.com/1422-0067/23/15/8087/htm

構造的に、ヒトIgG のN-型糖鎖修飾は通常、二分岐複合型です。 もうひとつのN-型糖鎖修飾部位は、VH と VL (それぞれ可変領域の重鎖と軽鎖) にあり、すべての血清IgG の15 ~ 25% で観察されています。 IgG Fab 領域に糖鎖が存在すると、抗体の安定性が高まり、抗原結合が調節される可能性があります。 IgG3 では、Fab および Fc 領域に存在する N-型糖鎖とは別に、ヒンジ領域に O-型糖鎖の存在も観察されます。

血清中には、IgG3 ポリクローナル抗体の約 10%、IgG3 モノクローナル抗体の約 13% が O-型糖鎖修飾を含むと考えられています。各 IgG3 分子は、ヒンジ領域内の三重反復領域のスレオニン残基に結合した最大三つのO-型糖鎖を含むことができます。IgG O-型糖鎖修飾の機能はまだ完全には理解されていませんが、ヒンジ領域の構造は、タンパク質分解による切断から免疫グロブリンを保護し、IgG3 の拡張構造と柔軟性を維持するのにも役立ちます。

本研究では、進行性子宮内膜症に関して、O-型糖鎖が進行性子宮内膜症の血清IgG で発現しているかどうか、また二分岐N-型糖鎖の存在に加えて、IgG に高度に分岐したN-型糖鎖も存在するかどうかが調べられました。

血清 IgG O-型糖鎖修飾および多分岐N-型糖鎖修飾の発現分析のために、O-型糖鎖認識レクチン (MPL、VVL、およびジャカリン) および多分岐N-型糖鎖認識レクチン (PHA-L) を用いたレクチン ELISA が使用されました。また、サンプルとしては、単離された血清 IgG(i-IgG)、およびクルードな血清 IgG(s-IgG)両方が使用されました。

結果は驚くべきものでした。 s-IgGの場合、臨床的価値はほとんどありませんでした。しかし、i-IgG の場合、子宮内膜症が進行した女性と健康な女性、健康な女性と非子宮内膜症グループを比較した場合の両方で、使用した四つのレクチンすべてで最大の臨床値 (AUC = 1) が得られました。
この研究は、IgG における O-型糖鎖と多分岐N-型糖鎖の両方の発現が、進行した子宮内膜症の診断に応用できる可能性があることを示していますが、現在の研究段階では、これらの結論は主に血清から単離された IgG に関するものです。タンパク質の分離と精製は、面倒で時間のかかる作業であり、この種の診断法をルーチンの診断に適用するには大いに困難が伴います。それにもかかわらず、この研究の方向性は有望であると思われ、シンプルで迅速なタンパク質分離手順の開発が切望されます。

連作畑では、燻蒸処理は生物剤処理よりも優れていた:どうしてなんでしょうか?

School of Minerals Processing and Bioengineering, Central South University, Changsha, Chinaらのグループは、連作畑では、燻蒸処理は生物剤処理よりも優れていたと報告しています。
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC9354655/

連作を続けると、土壌の生理化学的特性と根圏細菌叢が変化し、土壌の塩類化と酸性化も進み、有害な微生物を蓄積させ、肥料効率を低下させ、深刻な土壌伝染病を引き起こし、収量の減少と農業生産における莫大な経済的損失をもたらします。

本研究では、燻蒸および生物剤処理を評価して、連作障害を緩和できるかどうかについて評価が行われました。 三つの燻蒸処理、すなわちクロルピクリン (FM1)、ダゾメット (FM2)、および未処理のコントロール (CK_FM)、および三つの生物学的処理、すなわち微生物学研究所の Jian Ye 教授が提供する 2 つの生物学的薬剤 (AG1 および AG2)、および未処理のコントロール (CK_AG) が比較されました。

何と驚くべきことに、生物剤処理と比較して、燻蒸処理はより強力な病気の抑制効果を示しました。更に、燻蒸処理はpHを上昇させただけでなく、土壌中の栄養素の利用可能性を高め、作物の成長を刺激しました。

細菌の多様性は、生物剤と比較して、燻蒸剤の適用によって大幅に減少しました。これは、燻蒸化学物質がしばしば生物にとって有毒であるという事実によって説明できます。燻蒸剤は、食品、種子、または人間の住居に損害を与える昆虫、線虫、およびその他の動植物を殺すためによく使用されるものであり、よく知られた有毒物質です。多様な根圏微生物叢が病気の感染に対して植物に利益をもたらし、植物の成長を促進することは広く受け入れられていますが、これは燻蒸処理に関する本研究で得られた結果とは対照的です。

考えられる説明は、根圏細菌叢全体を破壊する燻蒸処理によって根圏細菌叢が再構築され、それによって土壌特性と植物の性能に変化が起こり、連作障害の効果的な緩和をもたらした、ということかも知れません。

ストラチフィン(SFN)とプレセプシン(P-SEP)がCOVID-19の重症化の早期予測マーカーとなる

国立医薬品食品衛生研究所 医療安全科学部門らのグループは、血中のストラチフィン(SFN)とプレセプシン(P-SEP)が、COVID-19の重症化の早期予測マーカーとして使用できると報告しています。
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC9188980/

COVID-19 は、無症状から 急性呼吸窮迫症候群まで、幅広い症状を呈する感染症による呼吸器疾患です。重度または危機的な段階に至った急性呼吸窮迫症候群によって引き起こされる予後は不良です。従って、COVID-19 の重症例の早期発見が非常に重要です。

本研究では、肺損傷の5つのバイオマーカー、SP-D、KL-6、P-SEP、KAL、および SFN が分析されました。これらはすべて、血清サンプルで急性呼吸窮迫症候群またはその典型的な組織学的パターンである「びまん性肺胞損傷」に関連していることが示唆されています。 軽度または中等度の症状の患者と比較して、重度のCOVID-19 患者では、重度の COVID-19 のバイオマーカーとして提案されている P-SEP と同様に、血清 SFN が有意に上昇していることが初めて発見されました。

血清 SFN と P-SEP の両方が、重症前段階で明らかに上昇しています。重症前段階の診断におけるこれらのタンパク質の AUC 値 [95% CI] は、SFN で 0.83 [0.76–0.90]、P-SEP で 0.79 [0.69–0.89] でした。 COVID-19 患者の重篤前状態と軽度/中等度状態を区別する為の SFN と P-SEP のカットオフ値をそれぞれ 0.81 ng/mL と 374 pg/mL に設定した場合、感度と特異度は、SFNに対してそれぞれ 81.5%、70.1%、P-SEPでは、それぞれ 76.9% と 71.9% となりました。